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產(chǎn)品展示
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2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

  • 型   號:71814
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成,極大的提高了擴增長度、擴增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長片段、超保真、快速擴增的shou選產(chǎn)品。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)

 

2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

目錄號:71814

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品成份

71814-05

71814-0100

2× LongHiFi PCR Master Mix

5× 1 ml

100× 1 ml

保存條件

-20℃保存,有效期 2 年。

經(jīng)常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 個月。

產(chǎn)品簡介

2× LongHiFi PCR Mix為多種采zui xian進基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成極大的提高了擴增長度、擴增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長片段、超保真、快速擴增的shou選產(chǎn)品。

PCR產(chǎn)物為平末端,不需要加A頭,可直接用Blunt平末端系列載體克隆。

本產(chǎn)品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。使用時,只需加入模板、引物,并補足水至Mix終濃度為1×即可。

本制品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、熒光測序等后續(xù)操作。

產(chǎn)品特點

1. 高產(chǎn):一般 PCR 產(chǎn)物量比傳統(tǒng)產(chǎn)量高 50%-100%!

2. 高效:延伸速度可以達到 3-4kb/min,是 pfu 的 6-8 倍!

3. 高成功率:對于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復雜模板有良好效果!

4. 超高保真:保真度是 taq 的 81 倍以上。

5. 擴增長度長:以復雜基因組 DNA 為模板擴增可達 10kb,以簡單基因組、質(zhì)粒和噬菌體 DNA 為模板擴增可達 15kb。

2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用說明:

一、配制 PCR 反應(yīng)體系:(于冰上配制)

Component

20 μl Reaction

50 μl Reaction

終濃度

2× LongHiFi PCR Mix

10 μl

25 μl

1 ×

Forward Primer (10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.4 μl

1 μl

0.2 μM

Template DNA

as required

as required


ddH2O

up to 20 μl

up to 50 μl


參考模板用量:(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

質(zhì)粒:0.1-10 ng;

細菌基因組:10-100 ng;

人類基因組:50-150 ng;

cDNA:1-5 μl from RT。

注意:實際操作中,首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后,建議先加水,然后按上述順序添加其它成分,最后加 LongHiFi PCR Mix,瞬離,上機。

二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件:(請根據(jù)實際情況適當調(diào)整)

Step

Temperature

Time

Cycle Number

Initial denaturation

94℃

3 minutes


Denaturation

94℃

10 seconds

30-35 cycles

Annealing

50-60℃

10-15 seconds

Extension

72℃

15-20 seconds /kb

Final Extension

72℃

5 minutes



4-8℃

Hold


注意:一般情況下,Annealing Temperature = Tm - 5°C

1. 質(zhì)粒和簡單基因組等簡單模板,可以采用 10-15 sec/kb;復雜模板 ( 如人類基因組 DNA ),可以采用 20-25 sec/kb。

2. 對于高 GC 含量的模板,預變性和變性溫度可以提高到 98℃。

3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象,或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象,一般提示延伸時間過長,梯度縮短延伸時間(建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時間)直到獲得滿意結(jié)果。

三、結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

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